Tolesnis kiaulių viduriavimo vakcinos valymo procesas

Viduriavimas yra viena iš trijų pagrindinių ligų, padariusių didelių ekonominių nuostolių Kinijos kiaulių pramonei. Kiaulių viduriavimą sukelia daug veiksnių, o virusiniai veiksniai yra patys rimčiausi. Gali užsikrėsti įvairaus amžiaus kiaulės, ypač žindomi paršeliai, o mirtingumas po užsikrėtimo gali siekti daugiau nei 50 proc. Kiaulių epideminio viduriavimo virusas (PEDV) ir kiaulių užkrečiamasis gastroenterito virusas (TGEV) yra plačiai paplitę pasaulyje, abu virusai gali būti užsikrėsti atskirai arba kartu. Šiuo metu nėra specialių vaistų PEDV ir TGEV gydyti, o kiaulių viduriavimo prevencija ir kontrolė daugiausia yra komercinės vakcinos.

Tradicinės kiaulių epideminio viduriavimo vakcinos daugiausia apima viso viruso inaktyvuotą vakciną ir gyvą susilpnintą vakciną. Kliniškai dažniausiai naudojama PEDV ir TGEV tandeminė inaktyvuota vakcina arba susilpninta vakcina ir PEDV, TGEV ir kiaulių rotaviruso (RV) triguba inaktyvuota vakcina arba susilpninta vakcina, dažniausiai PEDV ir TGEV tandeminė vakcina.

Šiuo metu Kinijoje yra daug vakcinų nuo epideminio kiaulių viduriavimo.

Inaktyvuotų ir susilpnintų vakcinų gamybos procesas yra panašus, daugiausia apimantis penkis patogenų auginimo, patogeno inaktyvavimo arba susilpninimo etapus, patogenų ekstrahavimą ir gryninimą, vakcinos paruošimą ir pakavimą bei vakcinos kokybės kontrolę. Šiame straipsnyje daugiausia pristatoma patogenų valymo procedūra.

Paaiškinimas

Išaiškinimo tikslas – užtikrinti ląstelių nuolaužų ir kitų didelių dalelių agregatų pašalinimą. Ląstelių kultūroje gaminant įvairius nuodus, be to, kad juose yra daug viruso dalelių, yra daug ląstelių audinių nuolaužų ir medžiagų apykaitos produktų bei kitų priemaišų, todėl nuodai yra drumsti arba pusiau drumsti. Naudojant šią nuodų koncentracijos operaciją, greitai užsiblokuos ultrafiltravimo membrana ir nebus galima užbaigti nuodų koncentracijos, todėl ultrafiltravimo membranos laužas. Todėl prieš koncentruojant nuodus pirmiausia reikia juos nuskaidrinti, o tai dažniausiai daroma centrifuguojant mažu greičiu ir filtruojant membraną. Pažymėtina, kad naudojant membranos atskyrimo technologiją, kadangi membranos medžiaga dažnai būna su elektronegatyvumo ar hidrofobinėmis grupėmis, būtina ištirti, ar membranos medžiaga turi adsorbciją viruso dalelėms.

Veiksmingam nuskaidrinimo etapui reikalingas didelis kietųjų dalelių šalinimo pajėgumas ir didelė produkto išeiga, lengvas stiprinimas ir vėlesnių veikiančių įrenginių apsauga. Šiuo metu skaidrinimui naudojamas gilusis filtras.

Tačiau, kai auginimo mastas yra per didelis, reikės daug gilių filtrų membranų, todėl labai padidės vartojimo reikmenų kaina. Tuo pačiu metu didelis ląstelių kultūros tankis sumažins giluminio filtro membranos apkrovą, todėl padidės sąnaudos ir per didelis produkto praskiedimas.

Mikrofiltravimo metodas daugiausia naudoja tangentinio srauto filtravimo įtaisą, o membranos komponentai yra plokščios membranos kastė ir tuščiaviduris pluoštas. Tangentinį srauto filtravimą (TFF) lemia transmembraninis slėgio skirtumas. Medžiagos ir priemaišos, mažesnės nei membranos porų dydis, praeina pro membraną, o priemaišos, tokios kaip ląstelės su didesnėmis dalelėmis, yra sulaikomos. Mikrofiltravimui naudojamos membranos porų dydis yra {{0}},45/0,22 μm. Tuščiavidurio pluošto tangentinio srauto mikrofiltravimas gali tiesiogiai apdoroti didelio kieto kiekio skystį, pvz., didelio tankio ląstelių auginimo terpę, pašalinti centrifugavimo ir išankstinio filtravimo etapus su mažiau žingsnių ir paprasta operacija, membraną galima pakartotinai naudoti valant, sumažinant investicijas į įrangą ir eksploatuojant. sąnaudas, atitinkančias modulinės automatizuotos gamybos reikalavimus.

Koncentracija ir valymas

Po preliminaraus paaiškinimo viruso auginimo terpėje vis dar yra daug priemaišų, įskaitant sugedusias daleles, viruso apvalkalą, citotoksiną, terpę, serumą ir ląstelių fragmentus ir kt. Jei šios priemaišos bus sušvirkštos gyvūnams, jos ne tik turės įtakos vakcina, bet taip pat sukelia stiprų šeimininko imuninį atsaką ir netgi gali sukelti vakcinuotų gyvūnų mirtį. Todėl norint pašalinti priemaišas, tokias kaip heteroproteinai ir ląstelių fragmentai, sustiprinti ir sukelti veiksmingą imuninį atsaką, sumažinti naudojamos vakcinos kiekį ir sumažinti nepageidaujamas reakcijas, reikia koncentruoti ir išvalyti.

Viruso valymo principas: palaikyti viruso biologinį aktyvumą ir užkrečiamumą kaip prielaidą, pašalinti viruso priemaišas ir išgauti aukštą viruso grynumą.

Šiuo metu pagrindiniai koncentravimo ir gryninimo metodai, naudojami didelės apimties gamyboje, yra ultrafiltravimas.

Ultrafiltravimo metodas, daugiausia naudojamas tangentinio srauto ultrafiltravimo įtaisas, tuščiavidurių pluoštų filtravimo sistema ir kita filtravimo įranga, įprastomis aplinkybėmis ultrafiltravimo metodo taikymas gali padidinti viruso koncentraciją daugiau nei 100 kartų, o heteroproteino pašalinimo greitis iki 99%. Tarp jų, tuščiavidurio pluošto membraninio filtravimo technologija turi lengvos ir mažos šlyties jėgos, lengvo užkimšimo, lankstaus veikimo, ilgaamžiškumo ir mažos kainos bei lengvo amplifikavimo privalumus, todėl virusų koncentracijai ir valymui rekomenduojama rinktis tuščiavidurį pluoštą.

Kai koncentravimui ir valymui naudojamas ultrafiltravimo metodas, labai svarbu parinkti tinkamą membranos porų dydį, kuris tiesiogiai nulemia koncentracijos efektyvumą ir kokybę. Viena vertus, būtina pasirinkti membranos angą, kad būtų galima efektyviai sulaikyti tikslines molekules, kad būtų užtikrintas derlius, kita vertus, reikėtų visapusiškai atsižvelgti į heteroproteinų pašalinimo efektą ir apdorojimo greitį. Todėl geriausias principas yra pasirinkti didžiausio porų dydžio membraną, kuri gali sulaikyti tikslinę molekulę, ir pabandyti pasirinkti filtro membraną su vienodu porų dydžio pasiskirstymu.

Kiaulių epidemijos viduriavimo virusas (PEDV) ir užkrečiamojo gastroenterito virusas (TGEV) yra koronavirusai, kurie yra polimorfinės sferos su apverstais smaigaliais, kurių skersmuo svyruoja nuo 60 iki 190 nm. Rotavirusinė liga yra zoonozinė liga, kai rotavirusas (RV) atrodo kaip ratukas ir yra apie 70 nm skersmens. Šiuos tris virusus paprastai galima perimti naudojant 100-750kd diafragmos ultrafiltravimo membranas.

„Guidling Technology“ yra nacionalinė aukštųjų technologijų įmonė, daugiausia dėmesio skirianti biofarmacijai, ląstelių kultūrai, biomedicinos valymui ir koncentracijai, diagnostikai ir pramoniniams skysčiams. Sėkmingai sukūrėme išcentrinius filtrų įrenginius, ultrafiltravimo ir mikrofiltravimo kasetes, virusų filtrą, TFF sistemą, giluminį filtrą, tuščiavidurį pluoštą ir kt. Kurie visiškai atitinka biofarmacijos, ląstelių kultūros ir tt taikymo scenarijus. Mūsų membranos ir membraniniai filtrai yra plačiai naudojami koncentruojant, ekstrahuojant ir atskiriant išankstinį filtravimą, mikrofiltravimą, ultrafiltravimą ir nanofiltravimą. Mūsų daugybė produktų linijų, nuo mažo vienkartinio laboratorinio filtravimo iki gamybos filtravimo sistemų, sterilumo tyrimų, fermentacijos, ląstelių kultūros ir kt., atitinka bandymų ir gamybos poreikius. Guidling Technology laukia bendradarbiavimo su jumis!