Pramoninis{0}}Galvių infekcinio rinotracheito (IBR) vakcinos valymo procesas – „Ultrafiltracijos“ skyrius

Galvijų infekcinį rinotracheitą (IBR) sukelia infekcija galvijų infekcinio rinotracheito virusu (IBRV), dar vadinamu 1 tipo galvijų herpesvirusu (BHV-1). Šiai ligai daugiausia būdingi kvėpavimo takų simptomai ir abortas. Be šių klinikinių apraiškų, dėl IBR gali sumažėti pieninių galvijų primilžis ir sumažėti mėsinių galvijų svorio padidėjimas, todėl gyvulininkystės ūkiai patiria didelių ekonominių nuostolių.

Liga yra imunosupresinio pobūdžio. Kai pasireiškia kaip viena infekcija, jos patogeniškumas yra palyginti mažas; tačiau kai atsiranda mišrios infekcijos su kitomis virusinėmis ar bakterinėmis ligomis, jos sunkumas ir žala žymiai padidėja. Skiepijimas yra veiksmingiausias profilaktikos ir kontrolės būdas, nes yra dviejų pagrindinių tipų vakcinos: gyvos susilpnintos vakcinos ir inaktyvuotos vakcinos. Šiuo metu ūkiuose naudojamos vakcinos nuo infekcinio galvijų rinotracheito daugiausia yra inaktyvuotos vakcinos.

Gyvoms susilpnintoms vakcinoms būdingas stiprus imunogeniškumas, greitas imuniteto atsiradimas ir ilga apsaugos trukmė (dažniausiai daugiau nei šeši mėnesiai). Jie dažniausiai naudojami skubiai imunizacijai ligų protrūkių metu. Tačiau jie gali sukelti viruso plitimo pavojų, kelia pavojų vaikingoms karvėms ir negali būti naudojami latentiškai užsikrėtusiems, bet besimptomiams galvijams.

Inaktyvuotos vakcinos pasižymi dideliu saugumu, nekelia pavojaus, kad virusas išplis arba virs virulentiškumu, ir yra laikomos visiškai saugiomis. Jie gali būti naudojami visų etapų galvijams, įskaitant vaikingas karves, veršelius ir veislinius bulius. Tačiau imunitetas susidaro gana lėtai, o apsaugos trukmė trumpesnė, todėl dažniausiai prireikia revakcinacijų. Kai kuriais atvejais apsauginis veiksmingumas gali būti silpnesnis nei gyvų susilpnintų vakcinų.

Nepriklausomai nuo to, ar naudojama gyva susilpninta vakcina, ar inaktyvuota vakcina, tolesnis gryninimo procesas gali būti suskirstytas į keturis pagrindinius etapus: surinkimas ir nuskaidrinimas → koncentravimas ir pirminis valymas → poliravimas → inaktyvavimas / sterilus filtravimas ir formulavimas.

Koncentracija yra esminis tolesnio vakcinų valymo proceso etapas, iš karto po nuskaidrinimo. Pagrindinis jo tikslas yra greitai sumažinti surinktą didelio-tūrio, mažos{2} koncentracijos viruso išvalytą tirpalą iki mažos-tūrio, didelės-koncentracijos formos, išlaikant viruso biologinį aktyvumą. Taip sukuriamos būtinos sąlygos vėlesniems didelės-raiškos, bet mažos{7}}našumo smulkaus gryninimo etapams, pvz., chromatografijai.

Šis etapas paprastai atliekamas naudojant tangentinį srauto ultrafiltravimą (TFF). Principas yra toks: viruso pašarų tirpalas teka lygiagrečiai su specifinio porų dydžio ultrafiltracijos membranos paviršiumi. Esant slėgiui, mažos molekulės, tokios kaip vanduo, druskos ir tam tikros priemaišos, statmenai praeina per membraną ir pašalinamos, o nepažeistos viruso dalelės, kurios yra daug didesnės už membranos poras, išlaikomos, nuolat recirkuliuojamos ir koncentruojamos. Palyginti su tradiciniu didelės spartos centrifugavimu, šis metodas yra švelnesnis trapiems virusams, tokiems kaip IBRV, turintiems lipidų apvalkalą. Jis veiksmingai sumažina viruso struktūrinius pažeidimus ir aktyvumo praradimą, kurį sukelia didelės šlyties jėgos, ir yra labiau pritaikytas linijiniam masteliui -pramoninei gamybai.

Sėkminga koncentracijos operacija yra daug daugiau nei tiesiog tūrio sumažinimas. Pagrindiniai proceso optimizavimo punktai yra šie: tikslus transmembraninio slėgio ir tiekimo srauto valdymas, kad būtų subalansuotas filtravimo efektyvumas, kartu sumažinant koncentracijos poliarizaciją ir membranos užsiteršimą; tinkamos membranos medžiagos ir porų dydžio parinkimas, siekiant užtikrinti aukštą viruso sulaikymą ir prasiskverbimo srautą; ir rasti optimalią pusiausvyrą tarp viruso atkūrimo, koncentracijos faktoriaus ir apdorojimo laiko. Su koncentruota viruso suspensija ne tik pasiekiamas žymiai didesnis titras, bet ir preliminarus išvalymas pašalinant didelę vandenyje -tirpių priemaišų dalį. Tai suteikia reikiamą tūrio ir koncentracijos pagrindą tolesniems kritiniams tobulinimo etapams, tokiems kaip chromatografija ir apdorojimas nukleaze, todėl koncentracija tampa pagrindiniu efektyvumo centru visame tolesniame procese.

Antrinis diafiltravimas yra esminis vakcinos gryninimo žingsnis, atliekamas po smulkaus gryninimo ir prieš formuojant. Paprastai tai atliekama po chromatografijos ir apdorojimo nukleaze. Pagrindinis jo tikslas yra ne pradinė koncentracija, o sistemos mainai ir tikslus galutinio preparato sąlygų reguliavimas. Procesas atliekamas tangentinio srauto ultrafiltravimo (TFF) sistemoje, kai į cirkuliuojantį koncentruotą viruso tirpalą nuolat pridedamas šviežias, švarus preparato buferis, pašalinamas pradinis tirpiklis ir mažos molekulės priemaišos. Ši operacija efektyviai ir švelniai pašalina druskų likučius, organinius tirpiklius, nukleazės skilimo produktus ir tirpių priemaišų pėdsakus, likusius iš valymo proceso.

Svarbiausia yra išlaikyti pastovų tūrį arba atlikti nedidelius koncentracijos koregavimus, siekiant užtikrinti, kad viruso koncentracija atitiktų formuluotės specifikacijas. Dėl trapių, apvalkalą turinčių virusų, tokių kaip galvijų infekcinio rinotracheito virusas (IBRV), švelni hidrodinaminė antrinės diafiltracijos aplinka yra labai svarbi dalelių vientisumo ir imunogeniškumo išsaugojimui. Galiausiai šis žingsnis suteikia tvirtą pagrindą vėlesniam inaktyvavimui (jei reikia), adjuvanto ar stabilizatoriaus pridėjimui ir galutiniam užpildymui, užtikrinant, kad galutinis produktas pateks į formulę su apibrėžtais komponentais, vienodomis sąlygomis ir gerai suderinama. Todėl tai yra vienas iš pagrindinių žingsnių siekiant užtikrinti vakcinos saugą, stabilumą ir serijos-į-nuoseklumą.

IBRV yra apvalkalas, dvigubas -linijinis DNR virusas, turintis maždaug sferinį apvalkalą. Subrendusių IBRV dalelių skersmuo yra apie 160–230 nm. Atitinkamai, naudojant 100, 300 arba 500 kDa ultrafiltravimo membranas, galima išlaikyti IBRV, tuo pačiu pašalinant kai kuriuos teršiančius baltymus. „Jiuling Technology“ membraninių kasečių ultrafiltracijos atkūrimo greitis skiriasi priklausomai nuo žaliavos tipo, tačiau paprastai siekia 90–95%.