Veiksmingas ir nebrangus mieles ekspresuojančių rekombinantinių baltymų skaidrumo ir ultrafiltravimo procesas

Egzogeninių genų mielių ekspresija gali ne tik gaminti rekombinantinius baltymus ir peptidus, antikūnus ir vakcinas, citokinus, augimo faktorius, hormonus ir kitas biologiškai aktyvias medžiagas, bet ir gali būti naudojamas pramoniniams fermentams, funkciniams maisto produktams ir biologinėms medžiagoms gaminti, kurios turi plačias taikymo perspektyvas. .

 

Mielių ekspresijos sistema apima dvi dažniausiai naudojamas ekspresijos sistemas, tai yra saccharomyces cerevisiae ekspresijos sistemą ir metanotrofinę mielių ekspresijos sistemą. Metanolio mielių ekspresijos sistema šiuo metu yra plačiausiai naudojama mielių ekspresijos sistema, o dažniausiai naudojama Pichia, kuri gali naudoti metanolį kaip anglį ir energiją. Be to, yra Hanseno mielės, Sphaeroides ir pan.

 

Nesvarbu, kokia mielių ekspresijos sistema, jos pasroviui atskyrimo ir gryninimo procesai yra panašūs, o specifinis proceso srautas kaip pavyzdį ima rekombinantinių baltymų ir polipeptidinių vaistų mielių ekspresiją.

 

Vadovaujančios mikrofiltravimo membranos kasetės naudoja atviro srauto kanalo ir tangentinio srauto filtravimo režimą, kuris gali efektyviai apdoroti sudėtingą pašarų skystį, pvz., mielių fermentacijos skystį ir E. coli krekingo skystį dideliu greičiu, ir gali užtikrinti linijinį stiprinimą nuo mažo bandymo iki gamybos masto. Kompaktiška modulinė konstrukcija, paprastas vamzdyno sujungimas, sistemos nepriklausomumas ir skaitomumas gali apsaugoti operatorius ir užkirsti kelią biologinei taršai. Ir jokios priežiūros ir valymo patikrinimo. Todėl jis labai tinka ankstyvo tolesnio apdorojimo išaiškinimo etapui.

 

Pagrindinis UF/DF proceso tikslas yra pašalinti priemaišas ir išstumti buferius. Vadovaujanti ultrafiltravimo membranos kasetė turi gerą membranos porų dydžio homogeniškumą ir stiprų hidrofiliškumą, todėl membranai gali būti didesnis srautas ir mažesnė baltymų adsorbcija, optimizuotas srauto kanalo dizainas, mažesnis slėgio kritimas, lengvas medžiagos perdavimas ir žymiai sutrumpinti filtravimo laiką. Be to, gaminių serija yra išsami ir lanksti, kad atitiktų įvairaus masto poreikius. Todėl jis labai tinka UF/DF tolesnio apdorojimo etapui.

 

Toliau pateikiamas Guidling membranos panaudojimo atvejiskasetėrekombinantinių baltymų ekspresijoje mielėse.

 

Mikrofiltracijos nuskaidrinimas

1,5 l mielių fermentacijos skysčio (tikslinė baltymo molekulinė masė 42-55 KD) mikrofiltravimo būdu nuskaidrinti panaudojome {{0}},11 kvadratinių metrų 0,22 μm porų membranos kasetę. Viso mikrofiltravimo proceso metu buvo tiriamas tikslinio baltymo atkūrimo greitis, drumstumo kitimas ir membranos srauto išeikvojimas.

0-17min yra koncentravimo procesas, 17-32min yra plovimo ir filtravimo procesas. Viso mikrofiltravimo proceso metu TMP palaipsniui didėjo, skysčio įleidimo greitis nepasikeitė, o vidutinis medžiagos srautas buvo 45LMH.

Skysčio drumstumas buvo 600 NTU prieš mikrofiltravimą ir 8 NTU po mikrofiltravimo, o drumstumas pasikeitė akivaizdžiai.

Rezultatai parodė, kad tikslinio baltymo išeiga buvo > 90%. „Guidling Technology“ 0,22 μm membranos kasetė yra stabili ir tinka šiam naudojimo scenarijui.

 

Ultrafiltracijos koncentracija

 

 

Rezultatai parodė, kad tikslinis baltymas buvo visiškai įstrigęs. Guidling Technology 10 kd membranos kasetės gali veikti stabiliai ir yra tinkamos šiam taikymo scenarijui.

Dauguma mielių ekspresuojamų rekombinantinių baltymų nebuvo labai išreikšti. Filtruoto skysčio drumstumas akivaizdžiai sumažėjo, o baltymų atsigavimo greitis buvo didesnis. Kadangi vėlesnis chromatografijos laikas yra per ilgas, jis turės neigiamą poveikį baltymui, todėl norint sutrumpinti chromatografinių mėginių ėmimo laiką, galima pridėti vieną ultrafiltravimo koncentracijos etapą, o tikslinį baltymą galima greitai sukoncentruoti po mėginio, o tai gali pasiekti tikslą sutaupyti laiko, sumažinti užpildo tūrį ir taip sumažinti gamybos sąnaudas.

 

„Guidling Technology“ mikrofiltravimo membranos kasetės paprastai gali sumažinti tiekimo skysčio drumstumą iki mažiau nei 20 NTU, visiškai patenkindamos vėlesnio ultrafiltravimo ir chromatografijos poreikius. Ultrafiltravimo membranos kasečių ultrafiltravimo atkūrimo greitis skirsis dėl skirtingų medžiagų, bendras regeneravimo greitis gali siekti 90-95%.

„Guidling Technology“ kviečia jus prašyti testų rinkinių susijusiam įvertinimui.

 

Apie Guidlingą

„Guidling Technology“ yra nacionalinė aukštųjų technologijų įmonė, daugiausia dėmesio skirianti biofarmacijai, ląstelių kultūrai, biomedicinos valymui ir koncentracijai, diagnostikai ir pramoniniams skysčiams. Sėkmingai sukūrėme išcentrinius filtrų įrenginius, ultrafiltravimo ir mikrofiltravimo kasetes, virusų filtrą, TFF sistemą, giluminį filtrą, tuščiavidurį pluoštą ir kt. Kurie visiškai atitinka biofarmacijos, ląstelių kultūros ir tt taikymo scenarijus. Mūsų membranos ir membraniniai filtrai yra plačiai naudojami koncentruojant, ekstrahuojant ir atskiriant išankstinį filtravimą, mikrofiltravimą, ultrafiltravimą ir nanofiltravimą. Mūsų daugybė produktų linijų, nuo mažo vienkartinio laboratorinio filtravimo iki gamybos filtravimo sistemų, sterilumo tyrimų, fermentacijos, ląstelių kultūros ir kt., atitinka bandymų ir gamybos poreikius. Guidling Technology laukia bendradarbiavimo su jumis!