SP stipriųjų katijonų mainų membranos chromatografija

CM silpnųjų jonų{0}}mainų membranos chromatografijos produktų įvadas

 

1. Apžvalga

CM silpnųjų katijonų -mainų chromatografija yra gryninimo technologija, kai karboksimetilo grupės sujungiamos prie membranos ir sudaro funkcinį modulį. Atskyrimas pasiekiamas remiantis įvairių biomolekulių krūvio savybių ir krūvio tankių skirtumais. Kadangi daugumoje biologinių makromolekulių yra karboksilo arba hidroksilo grupių, jų krūvio charakteristikas ir dydį galima reguliuoti keičiant buferinio tirpalo pH vertę. Po to, kai biomolekulės prisijungia prie membranos modulio, turinčio priešingus krūvius, eliuavimas atliekamas keičiant judriosios fazės jonų stiprumą arba pH. Molekulės, turinčios silpnesnį rišimosi afinitetą, išplautos pirmiausia, o tos, kurių jungimosi afinitetas yra stipresnis, vėliau, taip pasiekiamas efektyvus atskyrimas.

 

2. Produkto privalumai

2.1 Greitas ir efektyvus: didelis surišimo pajėgumas gali būti pasiektas esant iki 40 kartų didesniam srautui nei naudojant įprastą dervos{2} chromatografiją. Palyginti su tradicine sluoksnine chromatografija, membraninė chromatografija gali sutrumpinti proceso laiką 30–40 kartų. Tipinis darbinis srautas yra 10 MV/min.

2.2 Didelis surišimo efektyvumas: Membraninė chromatografija rodo didelę apkrovą ir didelį srautą esant mažo slėgio kritimo sąlygoms, todėl įkrautas biomolekules galima užfiksuoti vienu praėjimu per modulį.

2.3 Keičiamas ir lankstus: visas membraninių chromatografijos produktų asortimentas gali patenkinti įvairius biomakromolekulių apdorojimo poreikius, apimančius etapus nuo proceso kūrimo iki didelio masto gamybos. Kapsulės konstrukcija leidžia naudoti vienkartinį-arba gali būti valoma ir pakartotinai naudojama, jei reikia.

2.4 Didesnis produktyvumas: kompaktiškas dizainas sumažina įrenginio pėdsaką. Pašalinus kolonėlės užpildymo, valymo, valymo patvirtinimo ir kolonėlės laikymo etapus, apdorojimas gali prasidėti po pusiausvyros su santykinai mažu buferio kiekiu. Nereikalaujant kolonėlės pakavimo, valymo ar sandėliavimo, darbo sąnaudos gali būti sumažintos iki daugiau nei 50%.

 

3 Techniniai parametrai

3.1 Konstrukcinės medžiagos

	Laboratorinė skalė	nedidelio masto	Pilotinė skalė	Gamybos mastai
Membranos tūris	0,2 ml	5 ml	140 ml	5L
Membranos atraminė struktūra	Polipropilenas
Membraninis korpusas	Polipropilenas
O žiedas	Silikono guma

3.2 Veikimo charakteristikos

	Laboratorinė skalė	mažas- mastelis	Pilot- skalė	Gamybos mastai
Membranos tūris	0,2 ml	5 ml	400 ml	5L
Rekomenduojamas srautas	1-6 ml/min	25-150ml/min	2-12L/min	25-150L/min
Maksimali darbinė temperatūra	35 laipsnių
Maksimalus darbinis slėgis	3 barai (25 laipsniai)
Maksimalus slėgio skirtumas	3 barai (25 laipsniai)
Laikymo sąlygos	20% etanolio vandeninis tirpalas

Palyginti su įprastomis terpėmis, CM membranos chromatografijos tarnavimo laikas yra panašus į CM agarozės gelio 6FF tarnavimo laiką.

1 pav. CM membraninės chromatografijos apkrovos gebos pokyčiai po daugkartinio naudojimo atliekant lizocimo bandymus.

Be to, membranos chromatografijos būdu įvertinome šeimininko ląstelių baltymų ir nukleorūgščių pašalinimo efektyvumą. Rezultatai pateikti žemiau.

1 lentelė. DNR ir ląstelės-šeimininkės baltymų pašalinimo greitis iš CHO-išreikštos IgG medžiagos naudojant CM membraninę chromatografiją

Eksperimentų serija parodė, kad CM membraninė chromatografija gali veiksmingai pašalinti teršalus išlaikant aukštą tikslinio IgG atkūrimo greitį.

	DNR				HCP
	IgG atkūrimas	Turinys (pg/mg IgG) pagal RT PGR		Pašalinimo faktorius	Turinys (ng/mg IgG) pateikė Elisa		Pašalinimo faktorius
Bėk	%	Prieš Q membraną	Po Q membranos	Žurnalas	Prieš Q membraną	Po Q membranos	Žurnalas
1	96.7	423	6.9	1.79	7	6.1	0.06
2	97.4	438	5.8	1.88	7	4.8	0.16
3	94.7	513	9.6	1.73	6	3.6	0.22
4	95	32	4.6	0.84	6	4.7	0.11
5	96.3	45	4.6	0.99	8	5.1	0.20
6	96.5	158	8.2	1.28	8	4.6	0.24
7	96.4	267	6.5	1.61	9	6.8	0.12
8	96.8	298	5	1.78	9	7.4	0.09
9	97.1	746	5.6	2.12	4	3.5	0.06
10	96.6	39	5	0.89	4	3.9	0.01

Naudojant Gudiling CM membraninę chromatografiją, lyginant su kitais prekių ženklais, apkrovos duomenys pateikti žemiau.

Pakrovimo talpa (mg/mL)	Jingbiao 1	Guidling
Lizocimas	18	23
Tripsinas	17	20

2 lentelė. Įvairių baltymų įkėlimas į mūsų gaminį, palyginti su konkurentų produktais

Bendras įvertinimas rodo, kad mūsų pakrovimo pajėgumas yra panašus į importuotų produktų.

2 pav. CM membranos chromatografijos modulio apkrovos bandymas, naudojant lizocimą kaip standartinį baltymą.

Dinaminis krovumas taip pat buvo lyginamas su importuotų produktų krovumu. Tikrinimas parodė, kad lizocimas gali būti išplautas naudojant 160 mM NaCl, kuris leidžia efektyviai užfiksuoti daugumą tikslinių baltymų.

Optimizuodami skirtingas eliuavimo sąlygas, mes nustatėme, kad membraninė chromatografija pasižymi eliuavimo elgesiu, panašiu į agarozės gelio chromatografiją, kur baltymų grynumas labai skiriasi esant skirtingoms druskos koncentracijoms. Atliekant praktinius mokslinius tyrimus, plėtrą ir gamybą, norint gauti didelio grynumo tikslinį baltymą, būtina kiekybiškai nustatyti pusiausvyros eliuavimo sąlygas.

 

4. Tipiniai taikymo atvejai

• DNR, virusų ir šeimininko ląstelės baltymų pašalinimas
• Plazmidžių, virusų ir baltymų fiksavimas, taip pat oligonukleotidų valymas
• Mielių fermentacijos sultinio spalvos pašalinimas ir didelės{0}}talpos baltymų surinkimas

 

5. Darbo tvarka / Darbo eiga

5.1: Įrangos paruošimas ir surinkimas:

5.1.1: Įdiekite membranos chromatografijos modulį AKTA chromatografijos sistemoje. Diegimo būdas panašus į supakuotą-sluoksninę chromatografijos terpę; įsitikinkite, kad srauto kryptis atitinka ant modulio pažymėtą rodyklę. Modulis gali būti prijungtas naudojant Luer jungtis arba spaustukus.

5.1.2 Nustatykite 5–10 MV/min įleidimo srautą ir naudokite pusiausvyros buferį orui iš modulio išvalyti. Tęskite praplovimą, kol prie išleidimo angos neatsiras burbuliukų, tada prijunkite permeato išleidimo angą prie chromatografinės sistemos.

5.2.:Parengimas prieš-naudojimą

5.2.1: Nustatykite įleidimo srauto greitį 5–10 MV/min ir atlikite išankstinį apdorojimą naudodami 0,5 M NaOH daugiau nei 5 MV, kad įsitikintumėte, jog membrana pasiekia pusiausvyrą.

5.2.2: Esant tokioms pačioms srauto greičio sąlygoms, atlikite išankstinį apdorojimą 1 M NaCl daugiau nei 5 MV, kad įsitikintumėte, jog membrana pasiekia pusiausvyrą.

5.3. Chromatografijos procesas

5.3.1 Įleidimo srauto greitį nustatykite į 5–10 MV/min ir atlikite išankstinį apdorojimą balansavimo buferiu daugiau nei 5 MV, kol membrana pasieks pusiausvyrą.

5.3.2 Po 0,22 μm pirm

5.3.3 Plaukite su pusiausvyros buferiu daugiau nei 10 MV, kol UV reikšmė sumažės iki pradinės linijos.

5.3.4 Pagal proceso planą, taikykite gradientinį eliuavimą arba linijinę eliuavimo sistemą ir, jei reikia, surinkite frakcijas segmentais.

5.4 CIP apdorojimas po-naudojimo – CIP (Clean-in-Place) membranos chromatografijos sistemai.

5.4.1 Įleidimo srauto greitį nustatykite į 5–10 MV/min ir apdorokite 1 M NaOH ilgiau nei 10 MV, kol UV vertė nukris žemiau bazinės linijos.

5.4.2 Po 30 minučių cirkuliuojančio plovimo nuplaukite vandeniu, kol pH bus tarp 7 ir 8, tada pereikite prie 20 % etanolio ir tęskite valymą, kol laidumas beveik nepasikeis.

5.5 Membraninės chromatografijos saugykla

Panaudojus ir užbaigus CIP, membraninį modulį galima nuimti ir laikyti pamirkius 20 % etanolyje arba laikyti tinkle kambario temperatūroje tirpale, kuriame yra 20 % etanolio. 20 % etanolio tirpalas turi būti reguliariai tikrinamas ir keičiamas.

 

6, Užsakymo informacija

CM{0}}tipo silpnų katijonų mainų membranos chromatografijos kapsulinis filtras

	Laboratorinė skalė	Mažo masto	Pilotinė skalė	Gamybos mastai
Modelis	IEXCM0002ES	IEXCM0050ES	IEXCM0400ES	IEXCM5000ES
Membranos sritis	0,2 ml	5 ml	400 ml	5L

Populiarus Žymos: sp stipri katijonų mainų membraninė chromatografija, Kinija, tiekėjai, gamintojai, gamykla, didmeninė prekyba, urmu, sandėlyje, nemokamas pavyzdys