DUK apie išcentrinius filtrų įrenginius
Q1. Būtina atskirti skirtingos molekulinės masės baltymus, tad kokio skirtumo reikėtų baltymų molekulinėms masėms?
A: Dviejų baltymų dydis turi skirtis 10 ar daugiau kartų.
Q2. Gali centrifuguotiAlfiltrų prietaisai turi būti sterilizuoti ir atsparūs plovimui šarmais?
A: Jį galima sterilizuoti 75 procentų etanolio vandeniniu tirpalu, o membrana gali atlaikyti 0.1-0.5 N natrio hidroksido šarminį plovimą.
Q3. Kaip elgtis, jei koncentruojantis baltymas nusėdo?
A: Jei baltymas koncentruojamas per greitai arba per koncentruotas, tai gali sukelti baltymų nusodinimą, o galutinė baltymų koncentracija po koncentracijos neturėtų būti per didelė; Baltymai, jautrūs koncentracijos greičiui ir linkę nusodinti, siūlomas patobulinimo metodas:
Sumažinkite išcentrinį greitį
Naudokite ultrafiltravimo membraną su didesnės molekulinės masės riba
Išpūskite ir išsiurbkite koncentruotą mėgintuvėlį, tada centrifuguokite
Q4. Kokia galima priežastis, kodėlišcentriniai filtrų įrenginiainegalima centrifuguoti žemyn?
A: Pradiniam centrifugavimui galite naudoti apie 20 procentų etanolio vandeninį tirpalą, jei ultrafiltravimo vamzdelio negalima centrifuguoti, nes ultrafiltravimo membrana yra visiškai sausa, membranos paviršius yra silpnai hidrofobinis, o srautą galima atkurti po infiltracijos paviršiaus įtempimo tirpiklis.
Q5. Teisingi išcentrinių filtrų įtaisų naudojimo būdai ir saugojimas
A: Prieš naudojant išcentrinius filtrų įtaisus reikia centrifuguoti išvalytu vandeniu, kad būtų patikrintas jų vientisumas. Po kiekvieno naudojimo jį reikia laikyti drėgnoje būsenoje, kad membrana neišdžiūtų.
Q6. Kaip išcentriniai filtrai pašalina endotoksiną?
A: Mūsų pateikti išcentriniai filtrų įtaisai nebuvo apdoroti endotoksinais, todėl gamtoje endotoksinų gausu, todėl mėginius, kuriems reikia endotoksinų, prieš eksperimentą galima iš anksto išvalyti 0,5 N natrio hidroksidu, o tada nuplauti RO vandens, kad pašalintų didžiąją dalį endotoksino.
Q7. Kai koncentruotas baltymas naudojamas pasrovinei analizei, nustatoma, kad yra trukdžių, kokia priežastis?
A: Išcentriniai filtrų įtaisai gali būti iš anksto nuplauti buferiniu tirpalu arba išvalytu vandeniu. Jei trikdžiai vis dar išlieka, nuplaukite 0,1N natrio hidroksidu, tada nuplaukite išvalytu vandeniu.
Q8. It nustatoma, kad po koncentracijos koncentrate nėra tikslinio baltymo. Kokios galimos priežastys?
A: 1) Pradinė baltymų koncentracija neturėtų būti per maža, jei koncentracija per maža, membrana gali nesugebėti išlaikyti.
2) Pasirinkite tinkamą membranos porų dydį. Išcentrinė filtro vamzdžio koncentracija priklauso aklavietės filtravimui, o membranos porų dydis paprastai yra mažesnis nei 2 kartus arba didesnis nei tikslinio baltymo.
3) Pasirinkite tinkamą išcentrinį greitį
4) Ar tikslinis baltymas nusėda
Q9. Išcentrinių filtrų įtaisų pasyvinis apdorojimas
A: Pasyvinis išcentrinių filtrų įtaisų paviršiaus apdorojimas gali sumažinti baltymų adsorbcijos praradimą ant membranos paviršiaus, daugeliu atvejų išankstinis kolonėlės apdorojimas prieš koncentruojant praskiestą baltymų tirpalą gali pagerinti regeneraciją, nes tirpalas gali užpildyti paveiktą vietą. tuščios baltymų adsorbcijos vietos ant membranos ir paviršiaus, pasyvavimo būdas yra iš anksto mirkyti kolonėlę dideliu kiekiu pasyvinimo tirpalo ilgiau nei 1 valandą, kruopščiai nuplauti kolonėlę distiliuotu vandeniu ir vieną kartą centrifuguoti kolonėlę distiliuotu vandeniu. Norėdami visiškai pašalinti pasyvavimo tirpalą, kuris gali likti ant membranos, būkite atsargūs, kad po pasyvavimo membrana neišdžiūtų, jei norite ją pasilikti naudoti ateityje, turite įpilti sterilaus distiliuoto vandens, kad membrana liktų drėgna. mūsų inžinieriai bendrų pasyvavimo sprendimų.
Q10. Ar ultrafiltravimo membrana hierarchiškai filtruoja molekules?
A: Generally speaking, if the dead-end filtration method is used, it is difficult to accurately remove small molecules among several large molecules by ultrafiltration method. This is because the membrane is a porous network structure, and its filtration mechanism is based on retention rather than passage, such as, the cut off rate of molecules larger than 100kd is >95 procentai, jei naudojama 100 kd ultrafiltravimo membrana, tačiau molekulės, mažesnės už membranos porų dydį, ne visiškai laisvai praeina pro membraną. 67 kd molekulinis sulaikymo greitis yra didesnis nei 70 procentų, o 43 kd baltymas taip pat yra daugiau nei 40 procentų, įvairūs mišraus tirpalo komponentai praeina per membraną ne taip paprastai ir lengvai kaip vieno komponento tirpalas. , jei norite išskirti dvi makromolekules, jų molekulinės masės skirtumas turėtų būti aštuonis ar daugiau kartų.
Q11. Kaip efektyviai atskirti dideles ir mažas molekules ultrafiltruojant?
A: Dėl proceso poreikių pašalinamos makromolekulėse esančios priemaišos arba iš makromolekulių pašalinamos mažos molekulės, tai yra normalu gamyboje. Labai svarbu pasirinkti tinkamą membranos porų dydį, filtravimo būdą ir veikimo sąlygas. Paprastai tariant, jei membranos MWCO specifikacija pasirenkama tarp dviejų baltymų, galima pasiekti santykinai idealų atskyrimą. Jei baltymų tirpalas yra santykinai atskiestas, darbas žemu slėgiu taip pat padės pasiekti geresnių rezultatų. Pasirinkite tangentinį srauto filtravimą ir atlikite daugkartinį diafiltravimą, kad gautumėte geresnį atskyrimo efektą.
