Ultrafiltracinio vamzdžio priežiūra ir naudojimas
Ultrafiltracinio vamzdžio priežiūra ir naudojimas
Ultrafiltracinio vamzdžio funkcija:
1) Koncentracija; 2) Desalting; 3) Pakeiskite buferį; 4) Jis turi dalinio valymo poveikį.
1. Naują ultrafiltracijos vamzdelį galima naudoti tiesiogiai be jokio kito apdorojimo;
2. Ultrafiltracijos vamzdelio negalima sterilizuoti aukštoje temperatūroje;
3. Ultrafiltracijos vamzdelio gydymas keičiant koncentruotą baltymą
Ultrafiltracijos vamzdis gali būti pakartotinai naudojamas. Mirkykite jį 0,1M NaOH 1-2h, nuplaukite vandeniu, tada nuplaukite atitinkamu tirpalu (sterilizuotu vandeniu arba PBS) ant centrifugos 3 kartus, kuris gali būti naudojamas naujiems baltymams koncentruoti;
4. Paprastai dedamas ultrafiltracijos vamzdelis
Dažnai naudojamam ultrafiltraciniam vamzdeliui pamirkykite jį 0,1M NaOH 1-2h, nuplaukite vandeniu ir mirkykite sterilizuotame vandenyje. Būtinai laikykite filtro membraną drėgną ir užkirskite kelią bakterijoms augti;
5. Ilgą laiką dedamas ultrafiltracijos vamzdelio gydymas
Jei ultrafiltracijos vamzdis ilgą laiką nenaudojamas, mirkykite jį 0,1 M NaOH 1-2h, nuplaukite vandeniu ir mirkykite 20% etanolio saugojimui. Būtinai laikykite filtro membraną drėgną ir užkirskite kelią bakterijoms augti;
6. Išcentrinis greitis, naudojamas ultrafiltraciniam vamzdžiui
Išcentrinis greitis paprastai yra 4000 aps./min. (paprastai rekomenduojamas 3000 g, o maksimalus – ne didesnis kaip 4000 g). Po centrifugacijos 5-8 minutes, 4ml mėginys gali būti koncentruotas į mažiau nei 1ml iki dešimčių mikroliterių; Jei greitis yra per didelis, tikslinis baltymas nukris, dėl to prarandamas tikslinis baltymas; Mažas greitis, daug laiko reikalaujantis ir mažas darbo efektyvumas;
7. Atsargumo priemonės, kai ginklo galvutė tęsiasi į ultrafiltracijos vamzdelį
Pridedant baltymų tirpalą ar buferį į ultrafiltracijos vamzdelį, galima naudoti mėlyną pistoleto galvutę; Tačiau, kai koncentruotas tikslinis baltymas absorbuojamas iš ultrafiltracijos vamzdžio dugno, turi būti naudojama geltona pistoleto galvutė; Kai pistoleto galvutė įkišama į ultrafiltracijos vamzdelį, ji turi būti apsaugota nuo filtro membranos neliesti, kad nebūtų pradurta filtro membrana;
8. Sumažinkite baltymų adsorbcijos praradimą ultrafiltraciniame vamzdelyje
Ultrafiltracijos vamzdelio membrana gali adsorbuoti baltymą, kuris sumažins tikslinį baltymą apie 30%; Siekiant sumažinti baltymų praradimą, absorbavus tikslinį baltymų tirpalą, nuvalykite ultrafiltracijos vamzdelio dugną baltymų buferiu, kad išplautumėte didžiąją dalį filtro membranos adsorbuotų baltymų ir sumažintumėte tikslinio baltymo praradimą; Jei išgrynintas baltymas yra koncentruotas, atkreipkite dėmesį, kad koncentruotas tūris neturėtų būti per mažas; Paprastai, nesvarbu, kaip centrifuguota, apačioje bus išlaikyta apie 200 μ L baltymų tirpalo;
9. Kaip apibrėžti ultrafiltracinio vamzdžio gedimą
Įprastai naudojant, kai filtro membrana nėra pradurta, koncentruotame baltymų tirpale nėra baltymų arba kiekis yra labai mažas (įskaitant tikslinį baltymą), o pirmajame filtruotame tirpale yra tikslinių baltymų, tai rodo, kad filtro membrana yra netinkama ir ją reikia pakeisti nauju ultrafiltracijos vamzdeliu.
